เนื้อหา
เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ใช้เพื่อกำหนดความเข้มข้นของสารประกอบบางอย่างเช่นโปรตีนในสารละลาย โดยทั่วไปแสงส่องผ่าน cuvette ที่เต็มไปด้วยตัวอย่าง วัดปริมาณแสงที่ดูดซับโดยตัวอย่าง เนื่องจากสารประกอบดูดซับแสงในช่วงสเปกตรัมที่แตกต่างกันจึงต้องตั้งค่าความยาวคลื่นที่เหมาะสมสำหรับการวิเคราะห์ มีหลายวิธีในการคำนวณความเข้มข้นของตัวอย่างที่ไม่รู้จักผ่านสเปคโตรโฟโตเมตรีอย่างไรก็ตามการใช้มาตรฐานอ้างอิงให้ความแม่นยำที่ดีที่สุด นอกจากนี้มาตรฐานยังระบุด้วยว่าเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ทำงานผิดปกติหรือมีปัญหาอื่น ๆ กับการวิเคราะห์หรือไม่
การคำนวณผ่านสมการเส้นตรง
วิเคราะห์มาตรฐานอ้างอิงที่จุดเริ่มต้นของการวิเคราะห์ มาตรฐานเป็นที่รู้จักกันในระดับความเข้มข้นและใช้ในการสอบเทียบอุปกรณ์และตรวจสอบความถูกต้อง ตัวอย่างทั้งหมดควรอยู่ในช่วงการทำงานของมาตรฐาน ถ้าไม่เช่นนั้นตัวอย่างจะต้องถูกทำให้เจือจางหรือความเข้มข้นของมาตรฐานเพิ่มขึ้น
จัดทำแผนภูมิกระจายหรือกราฟเส้นที่มีค่าความเข้มข้นมาตรฐานและค่าการอ่านค่าการดูดกลืนแสง ความเข้มข้นจะอยู่บนแกน y, การดูดซับบนแกน x ตัวอย่างเช่นมาตรฐานคือ 1 ppm, 2.5 ppm และ 5 ppm ค่าการดูดกลืนแสงที่กำหนดคือ 1 ppm = .25, 2.5 ppm = .5, และ 5 ppm = .75
จัดรูปแบบบรรทัดแนวโน้มเพื่อแสดงสมการบนกราฟ สมการจะแสดงสูตร y = mx + b ตัวอย่างเช่นการใช้มาตรฐานในขั้นตอนที่ 2 สมการคือ y = .1224x + 0.1531 เส้นแนวโน้มส่วนใหญ่ถูกดักจับที่ศูนย์ แต่ขึ้นอยู่กับวิธีการวิเคราะห์และค่า R-squared
วิเคราะห์ตัวอย่างที่ไม่รู้จักและบันทึกการอ่านค่าการดูดซับ
ใช้สมการ (y = mx + b) เพื่อกำหนดความเข้มข้นของตัวอย่าง
ทำความเข้าใจกับสมการเส้นตรง
ให้“ Y” เท่ากับความเข้มข้น นี่คือสิ่งที่จะแก้ไขให้
ให้ "X" เท่ากับค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่าง นี่คือค่าการดูดกลืนแสงที่วัดได้โดยสเปกโตรโฟโตมิเตอร์
อนุญาตให้ "" เท่ากับความชันและ "b" เพื่อเท่ากับจุดตัดแกน y ทั้งสองจะได้รับอย่างไรก็ตามหากเส้นแนวโน้มถูกบังคับผ่าน 0 ดังนั้น "b" จะเป็น 0
แก้ปัญหาเรื่องสมาธิ ใช้ตัวอย่างในขั้นตอนที่ 3 แทนที่ "x" เป็นค่าการดูดซับที่กำหนดที่ระดับ. 563 ดังนั้น:
y = .1224 (.563) + 0.1531
y (ความเข้มข้น) = .222011