เนื้อหา
blotting ตะวันตกเป็นหนึ่งในขั้นตอนทั่วไปในห้องปฏิบัติการทางชีวเคมี โดยพื้นฐานแล้วมันจะแยกโปรตีนออกจากตัวอย่างตามขนาดแล้วทดสอบโดยใช้แอนติบอดีเพื่อตรวจสอบว่ามีโปรตีนอยู่หรือไม่ มันมีประโยชน์ไม่เพียง แต่ในการวิจัย แต่ยังอยู่ในห้องปฏิบัติการทางการแพทย์หรือการวินิจฉัย; ยกตัวอย่างเช่นการทดสอบทั้งเอชไอวีและโรค Lyme เกี่ยวข้องกับการทดสอบเอนไซม์ immunosorbent assay (ELISA) ทดสอบตามด้วย Western blot ถ้า ELISA ทดสอบบวก แม้ความนิยมของมัน แต่ blotting ตะวันตกมีข้อเสียหลายประการ
Nonquantitative
บลอสเทิร์นคลาสสิคนั้นไม่มีคุณสมบัติ กล่าวอีกนัยหนึ่งในขณะที่พวกเขาสามารถบอกนักวิจัยได้ว่ามีโปรตีนชนิดหนึ่งอยู่หรือไม่พวกเขาไม่สามารถระบุปริมาณโปรตีนที่มีอยู่ได้ บริษัท เทคโนโลยีชีวภาพบางแห่งจำหน่ายชุดทดสอบที่ช่วยให้นักวิจัยหรือช่างเทคนิคในห้องปฏิบัติการหาปริมาณปริมาณโปรตีนที่มีอยู่โดยใช้เส้นโค้งมาตรฐาน แต่จะใช้ได้เฉพาะในกรณีที่มีตัวอย่างโปรตีนบริสุทธิ์ชนิดเดียวกันเท่านั้น ยิ่งไปกว่านั้นน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีนสามารถประมาณได้ด้วยการซับแบบตะวันตกแทนการวัดอย่างแม่นยำเหมือนกับการวัดมวลสาร
แอนติบอดี
สามารถใช้ Western blot ได้ก็ต่อเมื่อมีแอนติบอดีปฐมภูมิกับโปรตีนที่น่าสนใจ ในขณะที่แอนติบอดี้สำหรับโปรตีนหลายชนิดมีให้บริการจาก บริษัท เทคโนโลยีชีวภาพ แต่ก็ไม่ได้ราคาถูก ถ้าแอนติบอดีปฐมภูมิไม่สามารถใช้ได้กับโปรตีนที่กำหนดมันเป็นไปไม่ได้ที่จะทำการทดสอบแบบตะวันตกเพื่อหาโปรตีนนั้น ยิ่งไปกว่านั้นนักวิจัยอาจต้องการตรวจสอบว่ามีการดัดแปลงโปรตีนในทางใดทางหนึ่งหรือไม่ - ถ้าได้รับฟอสโฟรีเลชัน (มีกลุ่มฟอสเฟตติดอยู่) ตัวอย่างเช่น - และด้วยเทคนิค blot แบบตะวันตกที่พวกเขาต้องการแอนติบอดีจำเพาะ โปรตีน.
การอบรม
มันอาจเป็นเรื่องท้าทายที่จะแสดงความเป็นตะวันตกและใช้ผลลัพธ์ที่ดีดังนั้นพนักงานต้องได้รับการฝึกฝนมาอย่างดีในเรื่องนี้อย่างมากประสบการณ์อาจจะเป็นติวเตอร์ที่ดีที่สุด แม้สำหรับช่างเทคนิคที่มีประสบการณ์อย่างไรก็ตาม blot ตะวันตกใช้เวลานาน ตัวอย่างเช่นส่วนของอิเล็กโตรโฟรีซิสของการทดลองจะใช้เวลาประมาณหนึ่งถึงสองชั่วโมงในการทำงาน สามารถทำงานอื่นได้ในขณะที่เจลกำลังทำงานอยู่ แต่การทดลองยังคงใช้เวลาค่อนข้างนานในการรับผลลัพธ์
ข้อ จำกัด อื่น ๆ
แอนติบอดีบางครั้งอาจแสดงผลผูกพันนอกเป้าหมายบางอย่างซึ่งอาจทำให้ผลลัพธ์แย่ลง ยิ่งไปกว่านั้นเมื่อใช้ Western blotting คุณจะต้องใช้แอนติบอดี้ต่อต้านโปรตีนเฉพาะดังนั้นผลลัพธ์ของคุณจะบอกคุณได้ว่าโปรตีนนั้นมีอยู่จริงหรือไม่ ตรงกันข้ามสเปคโตรมิเตอร์มวลสารที่มีความละเอียดสูงจะเผยให้เห็นโปรตีนทั้งหมดที่อยู่ในตัวอย่าง แน่นอนว่ามันสำคัญที่ต้องจำไว้ว่าสเปกโตรมิเตอร์มวลสารนั้นมีราคาแพงกว่ามากและมีความท้าทายทางเทคนิคมากกว่าเมื่อเทียบกับการซับแบบตะวันตก