เนื้อหา
เจลอิเล็กโทรโฟเรซิสเป็นเทคนิคที่ช่วยให้ DNA สามารถวิเคราะห์ในระดับโมเลกุลที่เป็นส่วนประกอบ ในวิธีการสร้างภาพดีเอ็นเอนี้ตัวอย่างจะถูกวางบนสื่อกลางเจลอะกาโรสและใช้สนามไฟฟ้ากับเจล นี่เป็นสาเหตุให้ชิ้นส่วนดีเอ็นเอเคลื่อนย้ายผ่านเจลในอัตราที่ต่างกันตามคุณสมบัติทางเคมีไฟฟ้า
Ethidium Bromide
สำหรับเทคนิคการสร้างภาพข้อมูลนี้เอทิเดียมโบรไมด์ผสมกับผงอะกาโรส, บัฟเฟอร์ EDTA และน้ำในรูปแบบเจลเมทริกซ์ก่อนอิเล็กโตรโฟรีซิส เป็นผลให้โมเลกุลของเอทิเดียมโบรไมด์กระจายตัวสม่ำเสมอทั่วทั้งเมทริกซ์ เมื่อหลุมเจลเต็มไปด้วยตัวอย่าง DNA และสีย้อมติดตามของพวกเขาแรงดันไฟฟ้าจะถูกนำไปใช้เพื่อดึงสารประกอบขั้วขนาดใหญ่ที่ช้าข้ามเมทริกซ์
ในระหว่างการเคลื่อนไหวนี้ฐานของโมเลกุลดีเอ็นเอจะผูกเข้ากับอนุภาคชั่วคราวเนื่องจากประจุเอทิเดียมโบรไมด์นั้นจะถูกลากไปมา เมื่อเวลาเจลอิเล็กโทรโฟเรซิสเสร็จสมบูรณ์โมเลกุลของ DNA แต่ละอันจะถูกหยิบขึ้นมาด้วยอีธาเนียมโบรไมด์ในปริมาณที่มีนัยสำคัญ
ในที่ที่มีแสงอุลตร้าไวโอเลตนั้น ethidium bromide จะมีการเรืองแสง ช่างเทคนิคส่องแสง UV ที่ผ่านการปรับเทียบเป็นพิเศษทั่วเจลขณะที่เครื่องจับภาพชิ้นส่วนที่ส่องแสง
เมทิลีนบลู
หากไม่สามารถใช้ยูวีทรานสลูมิเนเตอร์ยูวีหรือใช้งานได้จริงช่างเทคนิคสามารถทำให้ DNA มองเห็นได้ภายใต้สภาวะปกติโดยการแช่เจล agarose ที่เสร็จสมบูรณ์แล้วโดยมี DNA อิเล็กโตรโฟรีเซสภายใน
เกลือคลอไรด์ที่มีประจุลบที่ไม่ชอบน้ำอย่างมีนัยสำคัญโมเลกุลเมทิลีนสีน้ำเงินจะแทรกซึมผ่านเมทริกซ์เจลทั้งหมด อย่างไรก็ตามพันธะไฮโดรเจนทั่วทั้ง DNA ทำให้โมเลกุลคราบสะสม ความหนาแน่นของคราบดีเอ็นเอที่เพิ่มขึ้นนี้ทำให้เกิดสีน้ำเงินเข้มขึ้นซึ่งมองเห็นได้ด้วยตาเปล่า
ติดตามสี
เกินขนาดญาติของแถบดีเอ็นเอช่างเทคนิคสามารถวัดขนาดที่แน่นอน (ในฐานคู่) ของแต่ละส่วนโดยใช้สารเคมีที่เรียกว่าสีย้อมติดตาม สามารถมองเห็นได้โดยไม่ต้องเติมเมธิลีนบลูหรือเอทิเดียมโบรไมด์สีย้อมติดตามเช่นโบรโมฟีนอลสีน้ำเงินและไซลีนไซลีนเคลื่อนที่ผ่านเจลอาราโกสเจลระหว่างอิเล็กโตรโฟรีซิสด้วยความเร็วเดียวกัน ในอิเล็กโตรโฟรีซิสชิ้นส่วนดีเอ็นเอขนาดใหญ่กว่าเดินทางผ่านเจลเมทริกซ์ด้วยความเร็วที่ช้ากว่าชิ้นส่วนที่เล็กกว่า ดังนั้นในขณะที่สีย้อมที่ติดตามจะไม่ส่งผลโดยตรงต่อการมองเห็นของชิ้นส่วนดีเอ็นเอการเปรียบเทียบตำแหน่งของชิ้นส่วนดีเอ็นเอในเจลกับตำแหน่งของสีย้อมเหล่านี้ช่วยให้ช่างเทคนิคสามารถ "เห็น" จำนวนนิวคลีโอไทด์โดยประมาณ