เนื้อหา
การคำนวณ titer สำหรับไวรัสเป็นวิธีที่ซับซ้อนในการบอกว่านักวิทยาศาสตร์กำลังนับจำนวนไวรัสในตัวอย่างเฉพาะ ในการคำนวณหา titers ไวรัสนักวิทยาศาสตร์ได้ทำการติดเชื้อแบคทีเรียที่กำลังเจริญเติบโตด้วยสารละลายไวรัสที่ความเข้มข้นต่างกันและหาจำนวนไวรัสในสารละลายดั้งเดิมโดยการนับจำนวนแบคทีเรียที่เสียชีวิตเนื่องจากการติดเชื้อไวรัส
Dilutions อนุกรม
ใส่ถุงมือเติมหลอดเพาะเลี้ยง 10 หลอดด้วยน้ำซุปขนาด 9 มล. และระบุว่า“ 10 ^ -1,”“ 10 ^ -2”,“ 10 ^ -3,” และต่อไปเรื่อย ๆ จนถึง“ 10 ^ -10” หลอดเหล่านี้ จะใช้สำหรับการเจือจางอนุกรมของไวรัสที่ใช้ในการคำนวณ phage titer เนื่องจากไวรัสสามารถเติบโตถึงระดับความเข้มข้นสูงอย่างไม่น่าเชื่อคุณต้องเจือจางเพื่อนับจำนวนพวกเขาอย่างมีประสิทธิภาพ แต่ละหลอดแสดงถึงการลดลงของไวรัสสิบเท่า
ใช้วัฒนธรรมไวรัส 1 มิลลิลิตรที่คุณต้องการคำนวณ phage titer และโอนไปยังหลอดที่ชื่อว่า“ 10 ^ -1” ด้วยปิเปต ผสมหลอดให้เข้ากัน นี่คือการเจือจางสิบเท่าครั้งแรกของคุณ
ใช้วัฒนธรรมผสม 1 มิลลิลิตรจากหลอดของคุณที่มีป้ายกำกับ "10 ^ -1" และโอนไปกับปิเปตใหม่ไปยังหลอดถัดไปที่มีข้อความระบุว่า "10 ^ -2" ผสมหลอดนี้ด้วย
ทำต่อรูปแบบนี้เพื่อสร้างอนุกรมการเจือจางอนุกรม คุณจะจบลงด้วย 9 หลอด 9 มล. และ 1 หลอด 10 มล. ปริมาณไวรัสในหลอดของคุณจะถูกเจือจางที่ใดก็ได้จาก 10 ครั้ง (หลอดแรกของคุณ) หรือ 100 ครั้ง (หลอดที่สองของคุณ) ถึงหมื่นล้านครั้ง (หลอดสุดท้ายของคุณ)
การเตรียมแผ่นสำหรับการคำนวณ Titer
นำวุ้นอ่อน tryptone 10 หลอดและแผ่น Petri 10 แผ่นแล้วติดฉลากให้สอดคล้องกับหลอดเจือจางอนุกรมของคุณ
คลายฝาปิดเพื่อไม่ให้หลุดออกจากความร้อนแล้ววางหลอดวุ้นของคุณลงในบีกเกอร์ของน้ำเดือด สิ่งนี้จะละลายวุ้นเพื่อให้คุณสามารถเทลงในเพลต Petri
โอนหลอดของคุณไปยังชุดน้ำร้อนอย่างน้อย 45 องศาเซลเซียส เพื่อให้แน่ใจว่าวุ้นของคุณไม่แข็งตัวในหลอดก่อนที่คุณจะมีโอกาสเทลงในจานเพาะเชื้อ
เพิ่มการเพาะเชื้อแบคทีเรียสองหยดลงบนวุ้นของคุณแล้วผสมให้เข้ากัน เหล่านี้เป็นแบคทีเรียที่จะถูกฆ่าตายช่วยให้คุณนับจำนวนของอนุภาคไวรัสในการแก้ปัญหาเฉพาะ
เพิ่ม 1 มล. ของการเจือจางแบบต่อเนื่องในหลอดอาการ์ที่เกี่ยวข้องในขณะที่หลอดยังคงอยู่ในอ่างน้ำร้อน ตัวอย่างเช่น 1 มล. ของการเจือจางอนุกรม 10 ^ -1 ของคุณควรเข้าไปในหลอดวุ้นที่มีป้ายกำกับว่า "10 ^ -1"
ผสมแต่ละหลอดแล้วเทแต่ละหลอดลงในแผ่น Petri ด้วยฉลากที่เกี่ยวข้อง สิ่งนี้จะสร้างวุ้นชั้นบาง ๆ ที่ได้รับเชื้อและแบคทีเรียในแต่ละแผ่น ปล่อยให้จานเจริญเติบโตข้ามคืนในตู้อบ
การนับและการคำนวณหาไวรัส
นำจานของคุณออกจากตู้อบและตรวจสอบ คุณควรเห็นบริเวณที่มีเมฆตลอดแผ่นซึ่งแบคทีเรียเติบโตขึ้นยกเว้นจุดที่ชัดเจนเล็ก ๆ ที่เรียกว่าโล่ โล่เหล่านี้เป็นแผ่นของแบคทีเรียที่ตายแล้วและคราบจุลินทรีย์แต่ละอันก็เป็นไวรัสตัวเดียว
ค้นหาแผ่นที่มีโล่ระหว่าง 30 ถึง 300 และนับจำนวนโล่ที่แน่นอนบนจานนั้น
ใช้จำนวนโล่ในจานของคุณและคูณด้วย 10 ถ้าคุณนับ 157 โล่คุณจะได้รับ 1570
คูณจำนวนที่คุณได้รับในขั้นตอนก่อนหน้าด้วยค่าผกผันของจำนวนในหลอดการเจือจางของคุณ ตัวอย่างเช่นหากแผ่นที่คุณเลือกเป็นแผ่น 10 ^ -5 คุณจะคูณ 1570 ด้วย 10 ^ 5 เพื่อรับ 157000000 หมายเลขสุดท้ายนี้คือ phage titer ของคุณและแสดงจำนวนไวรัสต่อมิลลิลิตรของวัฒนธรรมดั้งเดิมของคุณ