วิธีการคำนวณความเข้มข้นของเซลล์

นักวิทยาศาสตร์และช่างเทคนิคมักจะต้องคำนวณความเข้มข้นของเซลล์ในสารแขวนลอย ตัวอย่างเช่นเมื่อผู้ป่วยได้รับเลือดของเขาที่สำนักงานแพทย์ห้องปฏิบัติการสามารถใช้วิธีการบางอย่างเพื่อค้นหาปริมาณของเซลล์เม็ดเลือดขาวในปริมาณเลือดที่กำหนด สิ่งนี้ทำให้แพทย์ได้รับข้อมูลมากมายเกี่ยวกับสุขภาพของผู้ป่วยโดยเฉพาะระบบภูมิคุ้มกันของเขาและไม่ว่าเขาจะต่อสู้กับการติดเชื้อหรือความเจ็บป่วยอื่น การทดสอบเช่นนี้สามารถมองหาเซลล์อื่น ๆ ในเลือดเช่นเดียวกับไขสันหลังและของเหลวในร่างกายอื่น ๆ เช่นเซลล์อสุจินับจำนวนในน้ำอสุจิเพื่อวัตถุประสงค์ในการมีบุตร นักวิทยาศาสตร์ยังคำนวณความเข้มข้นของเซลล์ของแบคทีเรียยีสต์และจุลินทรีย์อื่น ๆ เพื่อวัตถุประสงค์มากมายตั้งแต่การวิจัยระบบนิเวศไปจนถึงเทคโนโลยีอุตสาหกรรม หนึ่งในเทคนิคที่พบบ่อยที่สุดก็คือการสอนในชั้นเรียนชีววิทยาวิทยาลัยจำนวนมากและจะใช้อุปกรณ์ที่เรียกว่าห้องนับ

ก่อนที่เซลล์แขวนลอยสามารถเข้าไปในห้องนับมันอาจต้องเจือจางเพราะมันอาจมีหลายพันหรือหลายล้านเซลล์ ในกรณีนั้นเซลล์ไม่สามารถนับได้อย่างสมเหตุสมผล ในการเจือจางตัวอย่างให้ใช้ปิเปตที่ผ่านการฆ่าเชื้อเพื่อวางสารละลายไมโครเซลล์สิบตัวในหลอดทดลองที่มี 90 ไมโครลิตรของสารเจือจาง ประเภทของสารเจือจางจะขึ้นอยู่กับชนิดของเซลล์ ผสมให้เข้ากันดี โซลูชันนี้ตอนนี้เจือจางมากกว่าตัวอย่างเริ่มต้นสิบเท่าดังนั้นปัจจัยเจือจางคือ 10^-1. ติดฉลากไว้ ทำซ้ำหลาย ๆ ครั้งโดยใช้ปิเปตที่ปลอดเชื้อทุกครั้งจนกว่าสารละลายจะเจือจางพอ หากคุณเจือจางเป็นครั้งที่สองหลอดทดลองที่สองจะเจือจางมากกว่าสารละลายเริ่มต้น 100 เท่าดังนั้นปัจจัยเจือจางคือ 10^-2 และอื่น ๆ

คุณอาจต้องลองใช้การเจือจางหลาย ๆ ครั้งเพื่อกำหนดปัจจัยการเจือจางที่เหมาะสมสำหรับห้องนับ ห้องนับเป็นกล่องสี่เหลี่ยมเล็ก ๆ ที่ชัดเจนและมีความลึกที่แม่นยำและตารางที่ถูกจารึกไว้ที่ด้านบน มันเป็นที่รู้จักกันว่า hemocytometer หรือบางครั้ง hemacytometer จุดประสงค์คือเพื่อให้การแขวนลอยเจือจางมากพอที่เมื่อมันถูกมองในห้องนับไม่มีเซลล์ที่ทับซ้อนกันและพวกมันจะถูกกระจายไปทั่วตารางในรูปแบบเดียวกัน ปิเปตสารแขวนลอยที่เจือจางซึ่งมีเซลล์เข้าไปในบ่อน้ำในห้องตรวจนับซึ่งมันจะเข้าไปในห้องกริดผ่านการกระทำของเส้นเลือดฝอย วางห้องนับบนเวทีกล้องจุลทรรศน์และดูภายใต้พลังงานต่ำ

ตารางประกอบด้วยสี่เหลี่ยมซึ่งทำจากสี่เหลี่ยมที่เล็กกว่า เลือกสี่เหลี่ยมประมาณสี่หรือห้าหรือหลายเซลล์ที่คุณต้องนับอย่างน้อย 100 เซลล์ในรูปแบบที่คุณเลือกเช่นมุมทั้งสี่และจัตุรัสกลาง หากเซลล์มีขนาดใหญ่อาจเป็นสี่เหลี่ยมขนาดใหญ่ แต่ถ้าเซลล์มีขนาดเล็กคุณอาจเลือกสี่เหลี่ยมที่มีขนาดเล็กลงแทน

ปริมาตรที่เฉพาะเจาะจงของแต่ละตารางสี่เหลี่ยมอาจแตกต่างกันไปตามผู้ผลิตห้องนับ แต่บ่อยครั้งที่ความลึกของห้องคือ 0.1 มิลลิเมตรพื้นที่ของสี่เหลี่ยมขนาดใหญ่คือ 1 ตารางมิลลิเมตรและพื้นที่ของสี่เหลี่ยมเล็ก ๆ คือ 0.04 ตารางมิลลิเมตร สี่เหลี่ยมที่ใหญ่กว่านั้นจะมีปริมาตร 0.1 ลูกบาศก์มิลลิเมตร สำหรับตัวอย่างนี้สมมติว่าคุณนับจำนวนเซลล์ทั้งหมด 103 เซลล์ในห้าช่องสี่เหลี่ยมและให้คุณเจือจางตัวอย่างเริ่มต้นจนกระทั่งปัจจัยเจือจางเท่ากับ 10^-2.

หากแต่ละตารางสี่เหลี่ยมมีปริมาตร 0.1 ลูกบาศก์มิลลิเมตรและห้าถูกนับแล้วปริมาณรวมของห้องที่ถูกนับคือ 0.5 ลูกบาศก์มิลลิเมตรและมีเซลล์ 103 เซลล์ สองเท่าที่จะทำให้มันเป็น 1 ลูกบาศก์มิลลิเมตรจะทำให้เซลล์ 206 หนึ่งลูกบาศก์เซนติเมตรเทียบเท่ากับ 1 มิลลิลิตรซึ่งเป็นการวัดที่มีประโยชน์สำหรับของเหลว มี 1,000 ลูกบาศก์มิลลิเมตรในหนึ่งลูกบาศก์เซนติเมตร ดังนั้นหากมีการระงับลูกบาศก์เซนติเมตรหรือมิลลิลิตรคุณจะต้องนับเซลล์ 206,000 (206 x 1,000) นี่คือสิ่งที่ดูเหมือนว่าเป็นสมการ:

ปริมาตรของตารางสี่เหลี่ยม×จำนวนสี่เหลี่ยมที่นับได้ = ปริมาณรวมของการระงับที่ถูกนับ

จำนวนเซลล์÷ปริมาตรของการนับที่ถูกนับ = การนับเซลล์ต่อมิลลิเมตรลูกบาศก์

จำนวนเซลล์ต่อมิลลิเมตรลูกบาศก์× 1,000 = จำนวนเซลล์ต่อมิลลิลิตร

คุณจะต้องคำนึงถึงการเจือจางที่ดำเนินการเพื่อให้วิธีการแก้ปัญหาเบื้องต้นนับได้ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ ในตัวอย่างนี้ปัจจัยเจือจางคือ 10^-2. ในการคำนวณความเข้มข้นเริ่มต้นของการแก้ปัญหา:

จำนวนเซลล์ต่อมิลลิลิตร÷ปัจจัยเจือจาง = ความเข้มข้นของเซลล์

สำหรับตัวอย่างนี้จำนวนเซลล์ต่อมิลลิลิตรคือ 206,000 และหารด้วย 10^-2 (0.01) ให้ความเข้มข้นของเซลล์ 20,600,000 เซลล์ต่อมิลลิลิตรในตัวอย่างเริ่มต้น