เนื้อหา
เมื่อพูดถึงการวัดความยาวของชิ้นส่วนดีเอ็นเอซึ่งมีขนาดเล็กกว่าเซลล์มากนักจุลชีววิทยาต้องการเคล็ดลับและสิ่งที่สะดวกที่สุดคือเจลอิเล็กโทรโฟเรซิส วิธีนี้ขึ้นอยู่กับความจริงที่ว่าชิ้นส่วนดีเอ็นเอถูกเรียกเก็บเงินและเป็นทางเลือกแทนวิธีที่แพงกว่าเช่น X-ray crystallography ซึ่งมีหน้าที่รับผิดชอบในการค้นพบโครงสร้างเกลียวคู่ของ DNA
Electrophoresis ทำงานอย่างไร
เนื่องจากโมเลกุลของ DNA มีประจุพวกมันจะได้รับผลกระทบจากกระแสไฟฟ้า เมื่อคุณตั้งค่าพวกเขาในเจลที่เป็นกลางและวางกระแสผ่านเจลโมเลกุลจะย้ายไปยังขั้วบวก (ขั้วบวก) เนื่องจากโมเลกุล DNA ที่มีขนาดแตกต่างกันมีประจุเท่ากันทำให้โมเลกุลที่เล็กกว่าเดินทางเร็วกว่าดังนั้นกระบวนการนี้จึงแยกโมเลกุลออกเป็นแถบที่สามารถเปรียบเทียบกับตัวอย่างของขนาดที่รู้จักได้
ขั้นตอนอิเล็กโทรพื้นฐาน
เจลมักทำจากอะกาโรสซึ่งเป็นโพลีแซคคาไรด์ซึ่งเมื่อถูกความร้อนในสารละลายบัฟเฟอร์จะเกิดเจลกึ่งแข็งและพรุนเล็กน้อย ที่ปลายด้านหนึ่งเจลจะสร้างรอยเว้าเล็ก ๆ ที่เรียกว่าหลุมซึ่งผู้วิจัยวางตัวอย่างดีเอ็นเอภายใต้การศึกษาพร้อมกับตัวอย่างอ้างอิงของความยาวที่รู้จักซึ่งเรียกว่าบันไดดีเอ็นเอ ความยาวของชิ้นส่วนบันไดได้รับการกำหนดล่วงหน้าด้วยวิธีอื่นเช่น X-ray crystallography
เมื่อเจลแช่อยู่ในสารละลายนำไฟฟ้าและแรงดันไฟฟ้าจะถูกนำไปใช้เศษชิ้นส่วนจะเริ่มเคลื่อนผ่านเจล - อันเล็กกว่าก่อนและใหญ่กว่าช้ากว่า ในที่สุดพวกเขาก่อตัวเป็นแถบคลื่นความถี่ตามขนาด
เมื่อสิ่งนี้เกิดขึ้นผู้วิจัยจะปิดไฟใส่เจลด้วยสีย้อมที่มีผลผูกพันกับ DVA และตรวจสอบตัวอย่างภายใต้แสงอุลตร้าไวโอเลต การใช้บันไดเป็นข้อมูลอ้างอิงผู้วิจัยสามารถกำหนดขนาดของชิ้นส่วนแต่ละชิ้นในแถบที่มองเห็นได้ มองเห็นได้เฉพาะแถบ - ชิ้นส่วน DNA แต่ละอันนั้นเล็กเกินกว่าจะมองเห็นได้
การกำหนดความยาวของชิ้นส่วนที่ไม่รู้จัก
โอกาสไม่ใช่ทุกกลุ่มในตัวอย่างที่จับคู่กับแถบบนบันไดดังนั้นเพื่อกำหนดขนาดของชิ้นส่วนที่ไม่รู้จักเหล่านี้นักวิทยาศาสตร์มักจะพล็อตกราฟ บนแกน x คือระยะทางที่แต่ละกลุ่มเดินทางในบันไดเป็นมิลลิเมตรในขณะที่แกน y คือขนาดของแต่ละวง เมื่อจุดเชื่อมต่อด้วยเส้นโค้งขนาดของวงใด ๆ สามารถคาดการณ์ได้จากเส้นโค้งหลังจากการวัดระยะทางที่เดินทางโดยวงนั้นในหน่วยมิลลิเมตร