เนื้อหา
- Advantage: ความไว
- ข้อได้เปรียบ: ความจำเพาะ
- ข้อเสีย: มีแนวโน้มที่จะเป็นผลลัพธ์ที่ผิดหรือเป็นอัตนัย
- ข้อเสีย: ต้นทุนสูงและความต้องการด้านเทคนิค
Western blot เทคนิคการวิเคราะห์ที่ใช้ในการระบุโปรตีนที่เฉพาะเจาะจงในตัวอย่างที่กำหนดใช้ความสามารถของเอนไซม์หลักหรือสารเรืองแสงที่มีการติดฉลากเรืองแสงเพื่อผูกกับแอนติเจนที่เฉพาะเจาะจงของมัน มันเป็นกระบวนการสามขั้นตอนที่เริ่มต้นด้วยเจลอิเล็กโทรโฟเรซิสตามด้วยการซับเมมเบรนและการตรวจด้วยแอนติบอดี การตรวจหาโปรตีนอาจเป็นทางตรงหรือทางอ้อมโดยใช้แอนติบอดีทุติยภูมิที่มีป้ายกำกับกำกับอยู่กับหลัก แม้ว่าได้รับการยอมรับว่าเป็นเทคนิคการวิเคราะห์โปรตีนตามปกติแต่ทว่า blot จากตะวันตกก็มีข้อ จำกัด และคุณประโยชน์
Advantage: ความไว
หนึ่งในข้อโต้แย้งที่ใหญ่ที่สุดในความโปรดปรานของ blot ตะวันตกคือความไวของมัน เนื่องจากความสามารถในการตรวจจับโปรตีนเพียง 0.1 นาโนกรัมในตัวอย่างเทคนิคจึงสามารถใช้เป็นเครื่องมือในการวินิจฉัยที่มีประสิทธิภาพ แต่ก็ยังสามารถตรวจจับการตอบสนองของภูมิคุ้มกันจากไวรัสหรือแบคทีเรียในตัวอย่างผู้ป่วย รอยเปื้อนจากทิศตะวันตกจะช่วยเพิ่มความไวนี้จากความสามารถของแอนติบอดี้ที่สองในการขยายความเข้มของสัญญาณที่ตรวจพบโดยระบบภาพ ความไวที่มากขึ้นหมายความว่าจำเป็นต้องใช้แอนติบอดีน้อยลงในการทดสอบ
ข้อได้เปรียบ: ความจำเพาะ
เทคนิค blot แบบตะวันตกนั้นมีความเฉพาะเจาะจงกับสองปัจจัยใหญ่ ขั้นแรกเจลอิเล็กโทรโฟเรซิสจะทำการสุ่มตัวอย่างเป็นโปรตีนที่มีขนาดประจุและโครงสร้างที่แตกต่างกัน กระบวนการนี้ในตัวมันเองเป็นขั้นตอนใหญ่ในการตรวจจับเนื่องจากแถบที่เกิดขึ้นในเจลนั้นได้ให้เบาะแสเกี่ยวกับขนาดของโปรตีนหรือโพลีเปปไทด์ที่น่าสนใจ ความจำเพาะของปฏิสัมพันธ์แอนติบอดี - แอนติเจนทำหน้าที่เป็นปัจจัยใหญ่ที่สอง เนื่องจากแอนติบอดีจำเพาะนั้นแสดงความสัมพันธ์กับโปรตีนเฉพาะกระบวนการจึงสามารถตรวจจับโปรตีนเป้าหมายได้แม้จะมีโปรตีนต่างกันถึง 300,000 ชนิดก็ตาม
ข้อเสีย: มีแนวโน้มที่จะเป็นผลลัพธ์ที่ผิดหรือเป็นอัตนัย
ทั้งๆที่ความไวและความเฉพาะเจาะจงของมัน, blot ตะวันตกยังสามารถให้ผลลัพธ์ที่ผิดพลาด ผลบวกผิดพลาดเมื่อแอนติบอดีตอบสนองกับโปรตีนที่ไม่ได้ตั้งใจซึ่งเป็นสิ่งที่เกิดขึ้นบ่อยครั้งเมื่อผู้ป่วยที่ได้รับการทดสอบเอชไอวีเกิดวัณโรคหรือการติดเชื้อปรสิตจำนวนหนึ่ง ในทางตรงกันข้าม false-negative อาจส่งผลให้ง่ายหากโปรตีนที่ใหญ่กว่าไม่ได้ให้เวลาเพียงพอที่จะถ่ายโอนไปยังเยื่อหุ้มเซลล์อย่างถูกต้อง การซับและการประมวลผลที่ไม่เหมาะสมมักจะทำให้เกิดการเบ้, จาง, หรือแม้กระทั่งหลายแบนด์ทำให้ผลการทดสอบขึ้นอยู่กับการตีความของช่างเทคนิค
ข้อเสีย: ต้นทุนสูงและความต้องการด้านเทคนิค
ค่าใช้จ่ายของ blot แบบตะวันตกนั้นประกอบด้วยค่าใช้จ่ายส่วนบุคคลจำนวนมากสำหรับแอนติบอดีที่มีแท็กนักวิเคราะห์ที่มีทักษะและอุปกรณ์ในห้องปฏิบัติการ กระบวนการที่ละเอียดอ่อนการซับแบบตะวันตกต้องใช้ความแม่นยำในทุกขั้นตอนเพื่อระบุตัวตนของกลุ่มตัวอย่างที่เหมาะสม ข้อผิดพลาดเล็กน้อยในความเข้มข้นของสารทำปฏิกิริยาหรือในระยะฟักตัวอาจเป็นหายนะสำหรับกระบวนการทั้งหมด ในที่สุดอุปกรณ์ที่จำเป็นสำหรับการตรวจจับและการถ่ายภาพ - ระบบตรวจจับสารเคมีเรืองแสงฟลูออเรสเซนต์กัมมันตภาพรังสีหรือเลเซอร์ - อาจมีราคาแพงเกินไปสำหรับหน่วยจุลชีววิทยาโดยเฉลี่ย