เนื้อหา
- อิเล็กโทรฟอเรซิสมีการวิเคราะห์ตัวอย่าง จำกัด
- การวัดด้วยอิเล็กโตรโฟรีซิสไม่แม่นยำ
- ต้องมีตัวอย่างการเริ่มต้นที่สำคัญ
- สามารถมองเห็นโมเลกุลที่แน่นอนได้เท่านั้น
- อิเล็กโทรโฟรีซิสมีปริมาณน้อย
เจลอิเล็กโทรโฟเรซิสเป็นเทคนิคที่แยกโมเลกุลทางชีวภาพออกจากกันและระบุไว้ในการวิจัยทางชีววิทยาหรือการวินิจฉัยทางการแพทย์ นับตั้งแต่การพัฒนาของพวกเขาในปี 1970 เทคนิคเหล่านี้ได้รับการประเมินค่าในการระบุยีน (DNA) และผลิตภัณฑ์ยีน (RNA และโปรตีน) ของงานวิจัยที่สนใจ ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมาเทคนิคที่ใหม่กว่าได้เกิดขึ้นที่ให้ความเฉพาะเจาะจงและรายละเอียดมากขึ้นเกี่ยวกับสิ่งที่เกิดขึ้นในระบบชีวิต ในขณะที่สิ่งเหล่านี้ไม่ได้แทนที่เทคนิคอิเล็กโตรโฟเรซิสและการจัดการขั้นสูงสามารถเพิ่มความมีชีวิตของเทคนิคได้ แต่สิ่งสำคัญคือต้องตระหนักว่าเจลอิเล็กโตรโฟรีซิสสามารถทำอะไรได้บ้าง
อิเล็กโทรฟอเรซิสมีการวิเคราะห์ตัวอย่าง จำกัด
อิเล็กโทรโฟเรซิสนั้นจำเพาะกับเนื้อเยื่อที่คุณได้ทดลอง ตัวอย่างเช่นหากคุณใช้ blot ทางใต้ (อิเล็กโตรโฟรีซิสชนิดหนึ่ง) บนสำลีแก้มคุณกำลังมองหายีนจากเซลล์บุผิวของแก้มของคุณและไม่มีที่อื่นในร่างกายของคุณ บางครั้งสิ่งนี้อาจเป็นประโยชน์ แต่นักวิจัยมักให้ความสนใจกับผลกระทบที่แพร่หลายมากขึ้น
เทคนิคเช่น In situ hybridization (ISH) สามารถแยกส่วนของเนื้อเยื่อและวิเคราะห์การแสดงออกของยีนในแต่ละพื้นที่เล็ก ๆ ของตัวอย่างนั้นดังนั้นนักวิจัยสามารถดูพื้นที่สมองทุกแห่งในตัวอย่างด้วย ISH ในขณะที่เทคนิคอิเล็กโตรโฟรีซิสสามารถดูได้ครั้งละไม่กี่พื้นที่เท่านั้น
การวัดด้วยอิเล็กโตรโฟรีซิสไม่แม่นยำ
เจลอิเล็กโทรโฟเรซิสสามารถแยกโปรตีนที่คล้ายกันออกมาได้อย่างมีประสิทธิภาพด้วยน้ำหนักที่แตกต่างกัน มันสามารถแยกพวกมันได้อย่างแม่นยำมากขึ้นผ่านเทคนิคที่เรียกว่า 2d อิเล็กโตรโฟรีซิส เรื่องนี้เป็นเรื่องธรรมดาในโปรตีน
แต่น่าเสียดายที่การวัดทั้งหมดที่ทำจากเทคนิคนี้เป็นแบบกึ่งปริมาณที่ดีที่สุด เพื่อให้ได้มวลที่แม่นยำ (น้ำหนัก) ของโปรตีนต้องใช้แมสสเปคโตสโคปีหลังจากการล้างโปรตีนด้วยอิเล็กโตรโฟรีซิส นอกจากนี้การเปรียบเทียบปริมาณสัมพัทธ์ของโมเลกุลที่แตกต่างกันนั้นขึ้นอยู่กับความหนาแน่นของแถบสี (ความมืด) ของจุดต่าง ๆ บนเจล วิธีนี้มีข้อผิดพลาดในระดับหนึ่งและตัวอย่างมักจะรันหลายครั้งเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่สะอาด
ต้องมีตัวอย่างการเริ่มต้นที่สำคัญ
อิเล็กโทรโฟรีซิสเป็นเทคนิคในการแยกและจำแนกสารชีวโมเลกุลต่าง ๆ ด้วยสายตา ทำได้โดยการส่งกระแสไฟฟ้าผ่านเจลเพื่อแยกโมเลกุลที่มีประจุของน้ำหนักต่างกัน หากโมเลกุลที่คุณสนใจนั้นไม่ธรรมดาพอวงดนตรีของมันก็จะมองไม่เห็นและยากที่จะวัด
สามารถขยาย DNA และ RNA ได้บ้างก่อนใช้อิเลคโตรโฟรีซิส แต่ไม่สามารถทำได้ด้วยโปรตีน ดังนั้นจึงจำเป็นต้องมีตัวอย่างเนื้อเยื่อขนาดใหญ่เพื่อเรียกใช้ชุดตรวจเหล่านี้ สิ่งนี้สามารถ จำกัด ประโยชน์ของเทคนิคโดยเฉพาะอย่างยิ่งในการวิเคราะห์ทางการแพทย์ แทบเป็นไปไม่ได้ที่จะเรียกใช้อิเล็กโทรโฟเรซิสบนตัวอย่างจากเซลล์เดียว flow cytometry และ immunohistochemistry เป็นที่นิยมใช้ในการประเมินการแสดงออกของโปรตีนต่อเซลล์ เทคนิคที่เรียกว่า PCR นั้นยอดเยี่ยมในการวัด RNA จำนวนเล็กน้อยอย่างแม่นยำ
สามารถมองเห็นโมเลกุลที่แน่นอนได้เท่านั้น
อิเล็กโตรโฟรีซิสนั้นยอดเยี่ยมในการแยกและระบุชีวโมเลกุลขนาดกลางถึงขนาดใหญ่ อย่างไรก็ตามโมเลกุลจำนวนมากที่นักวิจัยต้องการดูมีขนาดเล็กลง ฮอร์โมนขนาดเล็กสารสื่อประสาทและอิออนไม่สามารถวัดได้ด้วยอิเล็กโตรโฟรีซิส นี่คือเหตุผลสองประการ: พวกเขาไม่ตอบสนองอย่างถูกต้องกับการเตรียมอิเล็กโตรโฟรีซิส (โดยปกติจะเป็นเทคนิคที่เรียกว่า SDS PAGE) และแม้ว่าพวกเขาจะทำพวกเขามีขนาดเล็กเกินไปที่จะแยกออกจากกันอย่างเหมาะสม โมเลกุลเหล่านี้จะถูกวัดแทนโดยเทคนิคต่าง ๆ เช่น RIAAs (radio immunoassays) และ ELISAs (assay immunosorbant assay)
อิเล็กโทรโฟรีซิสมีปริมาณน้อย
โดยทั่วไปเจลอิเล็กโทรโฟเรซิสจะมีปริมาณงานต่ำซึ่งหมายความว่ามันจะไม่สร้างข้อมูลอย่างรวดเร็ว Contrast electrophoresis ซึ่งคุณสามารถดูโมเลกุล RNA จำนวนหนึ่งครั้งพร้อม PCR (ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส) ซึ่งสามารถประเมินตัวอย่างหลายพันตัวอย่างได้พร้อมกัน ในทำนองเดียวกัน flow cytometry สามารถทำการวัดจากเซลล์หลายพันเซลล์และสร้างความสัมพันธ์ที่ซับซ้อนในขณะที่อิเล็กโตรโฟรีซีสจะมองไปที่เซลล์ที่มีมวลและไม่สามารถแยกแยะได้ PCR และ flow cytometry เป็นตัวแทนของกระบวนการแบบขนานและอนุกรมอย่างหนาแน่นตามลำดับและทั้งสองสามารถทำได้ดีกว่าความสามารถของอิเล็กโตรโฟรีซิสในการสร้างข้อมูลการวิจัย