วิธีการนับโคโลนีในจุลชีววิทยา

เนื้อหา

• การเจือจางตัวอย่างการชุบและการบ่ม
• การนับด้วยตนเอง
• การนับอัตโนมัติ
• การนับที่ซับซ้อนมากขึ้น

หนึ่งในวิธีคลาสสิกในการกำหนดความเข้มข้นของจุลินทรีย์ในตัวอย่างคือการเจือจางตัวอย่างเติบโตจุลินทรีย์บนจานและนับอาณานิคม จุลินทรีย์ที่ผ่านการชุบนั้นจะเติบโตจากหน่วยสร้างอาณานิคมที่ประกอบด้วยเซลล์หนึ่งเซลล์หรือมากกว่านั้นไปเป็นอาณานิคมที่มองเห็นซึ่งสามารถมองเห็นและนับได้ แบคทีเรียเป็นเชื้อจุลินทรีย์ที่พบได้บ่อยที่สุดในการประเมินโดยใช้การนับจำนวนแผ่น การนับจำนวนอาณานิคมใช้เพื่อตรวจจับและนับจำนวนจุลินทรีย์ในดินน้ำและอาหาร โปรโตคอลสำหรับการนับอาณานิคมเน้นวิธีการที่ถูกต้องและเป็นระบบ

การเจือจางตัวอย่างการชุบและการบ่ม

หากคุณเพียงแค่กำจัดตัวอย่างจุลินทรีย์บนจานวุ้นคุณจะเห็นหน่วยที่ก่อตัวเป็นอาณานิคมจำนวนมากซึ่งแต่ละอาณานิคมจะรวมตัวกันทำให้ไม่สามารถนับได้ ในการแก้ปัญหานี้ให้ผสมตัวอย่างลงในสื่อที่เป็นของเหลวใช้ส่วนผสมนั้นจำนวนเล็กน้อยแล้วเจือจางลง ทำซ้ำขั้นตอนนี้หกถึง 10 ครั้ง กระจายการเจือจางสุดท้ายบนจานวุ้นและฟักเป็นเวลาสี่ถึงเจ็ดวันก่อนที่คุณจะนับอาณานิคม

การนับด้วยตนเอง

เคล็ดลับหลักในการนับอาณานิคมคือการนับจำนวนจุดแต่ละจุดในครั้งเดียว วิธีหนึ่งคือการตั้งจาน Petri บนพื้นหลังของกริดและนับจำนวนโคโลนีในแต่ละเซลล์ของกริดโดยเคลื่อนที่ในรูปแบบที่มีระเบียบผ่านทุกเซลล์ การทำเครื่องหมายอาณานิคมที่นับไว้ที่ด้านหลังของจานเพาะเชื้อก็เป็นวิธีที่มีประโยชน์เช่นกัน โดยทั่วไปคุณจะต้องนับอย่างน้อยสามแผ่น ใช้เพลทที่มีอาณานิคมเพียง 30 ถึง 300 เท่านั้นเพื่อทำการอ้างถึงอย่างมีประสิทธิภาพเครือข่ายจุลชีววิทยาซึ่งเป็น บริษัท ที่ให้บริการให้คำปรึกษาแก่ห้องปฏิบัติการและผู้ผลิตแนะนำ จานที่มีอาณานิคมที่มีจำนวนมากเกินกว่าที่จะนับหรือมีอาณานิคมน้อยเกินไปจำเป็นต้องชุบใหม่จากการเจือจางใหม่

การนับอัตโนมัติ

ความผิดพลาดของมนุษย์เพิ่มเวลาที่เกี่ยวข้องกับการนับอาณานิคมด้วยตนเอง ในการปรับปรุงทั้งความแม่นยำและประสิทธิภาพให้วางจาน Petri ไว้ในอุปกรณ์การนับอาณานิคมอัตโนมัติ ตัวนับอาณานิคมอัตโนมัติถ่ายภาพจานแยกอาณานิคมออกจากพื้นหลังแล้วใช้อัลกอริทึมในการนับอาณานิคมบนจาน อัลกอริทึมสามารถมีปัญหาในการแยกแยะอาณานิคมเมื่อสองหรือมากกว่าอาณานิคมสัมผัสที่ขอบดังนั้นนี่คือพื้นที่ของการพัฒนาซอฟต์แวร์อย่างต่อเนื่อง

การนับที่ซับซ้อนมากขึ้น

ความแม่นยำในการคำนวณความหนาแน่นของจุลินทรีย์จากการนับโคโลนีนั้นมีข้อ จำกัด บางประการ หน่วยการขึ้นรูปของโคโลนีสามารถเป็นเซลล์เดียวโซ่ของเซลล์หรือกลุ่มของเซลล์ทั้งหมด สมมติฐานคืออาณานิคมหมายถึงหนึ่งเซลล์ดังนั้นความเข้มข้นที่คำนวณได้จากการนับอาณานิคมจะต่ำ จุลินทรีย์ที่แตกต่างกันต้องการสภาวะการเจริญเติบโตที่แตกต่างกันและอาณานิคมบนจานจะเป็นตัวแทนของจุลินทรีย์เหล่านั้นที่เจริญเติบโตบนสื่อการเจริญเติบโตนั้นภายใต้เงื่อนไขการฟักตัว นอกจากนี้การนับอาณานิคมไม่ได้ลงทะเบียนเซลล์ที่ตายแล้วการพิจารณาที่สำคัญเมื่อคุณต้องการความเข้มข้นของเซลล์ในตัวอย่างดั้งเดิม